Identificação de epitopos lineares de célula B conservados e polimórficos entre diferentes cepas de Trypanosoma cruzi com potencial aplicação para sorodiagnóstico e sorotipagem

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

26/08/2011

RESUMO

Durante a fase crônica da doença de Chagas, devido a baixa parasitemia e altos títulos de anticorpos anti-T.cruzi, o diagnóstico é realizado preferencialmente por testes sorológicos. Porém, resultados inconclusivos ou contraditórios principalmente relacionados as características dos antígenos utilizados são observados. Os fatores que influenciam as manifestações clínicas da doença de Chagas não são bem conhecidos, mas ambas as variações genéticas dos hospedeiros e do parasito parecem estar envolvidos. Vários estudos tentando correlacionar a cepa de T. cruzi envolvida na infecção com manifestações clínicas da doença, usando hemocultura e/ou genotipagem baseada em PCR dos parasitos originados de tecidos humanos infectados, porém, ambas as técnicas possuem limitações. O objetivo deste trabalho foi identificar epitopos lineares de célula B conservados e polimórficos entre as cepas de T. cruzi por predição in silico e triagem experimental. Proteínas derivadas de genes cópias simples representados por pares de alelos no genoma de CL Brener foram os alvos deste estudo. Esta estratégia foi utilizada porque CL Brener é um recente híbrido entre as linhagens Tc II e Tc III, e epitopos polimórficos existentes entre os pares de alelos de CL Brener podem também ser polimórficos nos genótipos parentais. A reatividade de 150 peptídeos foi avaliada utilizando soro de camundongos C57BL/6 cronicamente infectados com as cepas Y (TcII), Colombiana (TcI) e CL Brener (TcVI) de T. cruzi. Um total de 36 peptídeos foram considerado reativos e a reatividade cruzada entre as cepas está em concordância com a origem evolucionária das diferentes linhagens de T. cruzi. Dois peptídeos similarmente reativos com as diferentes cepas e três com reatividade específica para cada cepa foram sintetizados em solução e testados em experimentos de ELISA e ELISA de afinidade. Um dos peptídeos com reatividade similar entre as cepas apresentou reatividade sem diferença estatística entre as cepas e foi reconhecido por anticorpos de média afinidade com uma especificidade de 93% e sensibilidade de 87%. Este peptídeo também foi diferencialmente reconhecido por soros de pacientes chagásicos com a forma cardíaca quando comparado com soro de pacientes com a forma indeterminada da doença e poderiam ser usado, além do sorodiagnóstico, para prognóstico ou auxílio na identificação de manifestações clínicas. O outro apresentou baixos valores de especificidade de (35%) e de sensibilidade (58%). O peptídeo reativo com a cepa Y também foi reativo com soro de pacientes infectados com TcI e os aminoácidos críticos para o reconhecimento por anticorpos foram identificados apenas no par de alelo pertencente ao haplótipo Esmo. De forma contrária, o peptídeo reativo apenas com Colombiana não foi reconhecido por soro de pacientes chagásicos infectados com TcII e o mapeamento dos aminoácidos mostrou que apenas o par de alelo do haplótipo Non-esmo possui o padrão de ligação a anticorpos. O último peptídeo discriminou corretamente a cepa CL Brener. Os três peptídeos polimórficos foram derivados de regiões repetitivas e juntos apresentaram um alto potencial uso para sorotipagem do parasito.

ASSUNTO(S)

parasitologia teses. sorotipagem decs tripanossoma cruzi teses. epitopos de célula b

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