Detecção e caracterização molecular de norovírus genotipos GII-11 e GII-19 em suínos assintomáticos

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2010

RESUMO

Os norovírus (NoV) são os maiores causadores de gastroenterites não-bacterianas em seres humanos no mundo todo, incluindo os casos associados com surtos de origem alimentar e veiculados pela água. Os membros da família Caliciviridae são vírus pequenos, ãoenvelopados e apresentam genoma de RNA fita simples positiva e poliadenilada. As noroviroses também têm sido encontradas em animais de produção como bovinos, suínos e ovinos. A detecção do RNA viral em suínos adultos assintomáticos em países da Europa, América do Norte, Australásia e América Latina tem levantado interesse na saúde pública, como a transmissão zoonótica dos NoV suínos aos seres humanos. Embora o papel do NoV suíno (PoNoV) ainda não esteja estabelecido nos países em desenvolvimento, estudos epidemiológicos têm demonstrado a ocorrência mundial dessa calicivirose nessa espécie animal. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi detectar NoV em amostras de fezes de animais assintomáticos em fase terminação (9-24 semanas de idade), em propriedades suinícolas (n=16) localizadas na cidade de Toledo, Estado do Paraná, Brasil. As amostras fecais (n=112) foram coletadas uma única vez em forma de pool diretamente das baias nos meses de Dezembro (2008) e Junho (2009) e estocadas a 4oC para posterior investigação. As reações de transcrição reversa seguida da reação em cadeia pela polimerase (RT-PCR) foram realizadas utilizando primers específicos desenhados para amplificar parcialmente a região Nterminal do gene que codifica a proteína do capsídeo do PoNoV. Os produtos de PCR apresentando 181pb de tamanho esperado foram purificados e a quantificação do produto amplificado foi realizada por meio de kits comerciais. O MegaBACETM foi utilizado para o sequenciamento, realizado com os primers forward e reverse. A análise de qualidade das sequências foram obtidas utilizando os softwares Phred e CAP3 e a procura de similaridades foi realizada com sequências depositadas no GenBank (BLAST). O alinhamento múltiplo e a matriz de identidade foram obtidas através do programa BioEdit. A árvore filogenética foi reconstruída a partir do algorítimo Neighbor-Joining, baseadas no modelo Poisson correction, com 1.000 replicações de bootstrap, utilizando-se o software MEGA 4. Oitenta e oito porcento (14/16) dos rebanhos investigados foram considerados positivos para a presença do NV. Além disso, em 51,8% (58/112) das amostras fecais foi verificada a presença do vírus. Setenta e dois porcento (5/7) das granjas brasileiras de terminação visitadas em 2008 tinham a circulação do NoV e todas as propriedades visitadas em 2009 (n=9) foram consideradas positivas para o PoNoV. A análise filogenética de sete sequências permitiu agrupar seis estirpes brasileiras do PoNoV no genogrupo II genotipo 11 (GII-11) e uma estirpe no GII-19, juntamente com outros isolados de PoNoV já caracterizados. Os resultados mostraram que o PoNoV está difundido nos rebanhos suínos incluídos neste estudo e uma alta frequência de infecção foi verificada em animais sem diarréia. Considerando o interesse da saúde pública sobre a transmissão zoonótica do PoNoV, esses resultados, obtidos em uma importante região brasileira de produção de suínos, evidenciam a importância de se realizarem futuros estudos epidemiológicos e moleculares em estirpes de NoV de origem suína.

ASSUNTO(S)

reação em cadeia de polimerase leitão (suíno) - doenças virologia veterinária swine diseases viroses em animais norovírus leitão (suíno) - filogenia veterinary virology virus diseases in animals

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