Clonagem e caracaterização funcional do gene da DNA polimerase de trypanosma cruzi

AUTOR(ES)

Michelle Barbi de Moura

DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

As células são constantemente expostas a diversos agentes de origem endógena ou exógena que causam lesões no DNA. Como estas lesões podem gerar mutações ou causar a morte celular, as células desenvolveram complexos sistemas de reparo para minimizar os danos, mantendo assim, a integridade do genoma. Entretanto, muitas lesões podem escapar das proteínas envolvidas no reparo e bloquear a maquinaria de replicação. Uma das maneiras encontradas pelas células para contornar esta situação foi desenvolver um mecanismo para realizar a síntese de DNA passando por estas lesões. Esse processo, denominado de síntese translesão, é realizado por um conjunto de DNA polimerases adaptadas a esta função, as polimerases da família Y. Ao contrário da maioria das polimerases, a Pol é capaz de replicar eficientemente a fita de DNA frente a uma variedade de lesões, como dímeros de timina, sítios AP e 8-oxoG, de uma forma livre de erros. Neste trabalho, nós clonamos e caracterizamos o gene da Pol de Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas. O gene TcPol codifica uma proteína que contém motivos que são conservados entre as polimerases da família Y. Ensaios in vitro demonstraram que a proteína recombinante é capaz de polimerizar diferentes moldes de DNA contendo ou não lesões. Apesar de complementar o fenótipo de sensibilidade à luz UV de leveduras que tiveram o gene RAD30 mutado, a superexpressão da TcPol em T. cruzi não aumentou a sobrevivência dos parasitos após tratamento com luz UV, cisplatina ou zeocina. A superexpressão também não foi capaz de promover a retomada do crescimento dos parasitos após a irradiação gama, mas aumentou a resistência destes após o tratamento com H2O2. Estes resultados sugerem que a TcPol pode ter um papel importante na síntese translesão de lesões oxidativas remanescente na fita de DNA durante a fase S, impedindo assim, o bloqueio da replicação.

ASSUNTO(S)

tripanossoma cruzi teses. bioquímica teses.

Documentos Relacionados

• Clonagem, expressão e produção de dna polimerase de alta fidelidade de pyrococcus furiosus
• Clonagem e estudo funcional do promotor do gene DREB da mamoneira (Ricinus communis L.)
• Detecção do DNA do Trypanosoma cruzi pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em pacientes chagasicos cronicos
• Clonagem e caracterização do gene da enzima Δ6-dessaturase de ácido graxo e análise de parte do genoma funcional de Thalassiosira fluviatilis
• Clonagem e caracterização de genes E3 do sistema proteassomo-ubiquitina de Trypanosoma cruzi