Caracterização funcional de dois cDNAs homólogos à ciclofilina e à proteína reprimida por auxina (ARP) identificados em bibliotecas subtrativas a para floração em tomateiro

AUTOR(ES)

Renata Kaline Souza Estevam

FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

09/09/2011

RESUMO

A floração é fundamental no ciclo de vida de uma planta. Este processo é marcado pela conversão do meristema apical vegetativo em reprodutivo, devido a interações entre diversos fatores, tanto internos quanto externos à planta. Diante disso, foram construídas oito bibliotecas subtrativa utilizando ápices meristemáticos induzidos e não induzidos para a floração de duas espécies de tomateiro: Solanum lycopersicum cv Micro-Tom e S. pimpinellifolium. Inúmeros cDNAs foram identificados e dentre estes, foram selecionados o cDNA homólogo a ciclofilina (LeCYP1) e a Proteína Reprimida por Auxina (ARP) para a caracterização in silico e funcional em espécie de tomateiro. Tem sido observado em outros sistemas vegetais que os genes LeCYP1 e ARP são importantes no processo de desenvolvimento da planta. Na análise in silico, foram utilizados diversos bancos de dados, tendo como critério de exclusão o E-value <1.0x10-15. Uma conservação para as proteínas analisadas foi observada por meio dos alinhamentos múltiplos e a presença de domínios funcionais. Em seguida, foram realizadas construções de cassetes de superexpressão para o cDNA homólogo à ARP em orientação senso e antissenso. Para esta etapa, foi utilizado o promotor forte CaMV35S presente no vetor intermediário pBC (Stratagene). A orientação do cDNA (senso ou antissenso) em relação ao promotor foi determinada por meio de enzimas de restrição e sequenciamento dos potenciais clones. Em seguida, este cassete foi transferido para o vetor binário pZP211 e os clones obtidos foram confirmados pelo padrão de restrição utilizando diferentes enzimas. Subsequentemente, estes cassetes foram transferidos para a Agrobacterium tumefaciens LBA4404 e posteriormente transformado em plantas de S. lycopersicum cv. Micro-Tom (MT) e MT-Rg1. Em adição, plântulas foram submetidas a tratamentos hormonais utilizando uma auxina sintética (ácido -naftaleno acético) e com ciclosporina A (inibidor de ciclofilina) e foi constatado que no tratamento hormonal houve alterações no padrão de desenvolvimento das raízes laterais, provavelmente relacionada ao déficit na sinalização da auxina ocasionada pela redução de LeCYP1 em plantas MT-dgt, enquanto que no tratamento com ciclosporina A, ocorreu um atraso no florescimento de plantas cv MT. Além disso, ensaios de PCR em tempo real (RT-qPCR) foram efetuados para análise de expressão dos cDNAs homólogos a LeCYP1 e ARP de modo a caracterizarmos funcionalmente estas sequências em plantas de tomateiro.

ASSUNTO(S)

lecyp1. arp construção de cassetes de superexpressão bibliotecas subtrativas solanum pimpinellifolium micro-tom floração bioquimica subtractive cdna libraries solanum pimpinellifolium micro-tom flowering overexpression cassette construction lecyp1 and arp.

Documentos Relacionados

• Caracterização de dois cDNAs homológos e uma AP endonuclease em cana-de-açúcar
• Caracterização funcional de dois cDNAs de cana-de- açúcar : PKCI e SHAGGY
• Caracterização de bibliotecas subtrativas de cDNA de genótipos susceptível e resistente de algodão infectados com Meloidogyne incognita.
• Identificação e caracterização de cDNAs expressos diferencialmente durantea maturação dos frutos de Coffea arabica L
• Isolamento e caracterização de cDNAs codificadores de proteases serina e aspartil de nematóide formador de galhas Meloidogyne incógnita.