CaracterizaÃÃo fÃsico-quÃmica e purificaÃÃo da bromelina do Ananas comosus (L.) Merril (Abacaxi-Bromeliaceae)

AUTOR(ES)

Roberto Afonso da Silva

DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

Bromelina à o nome genÃrico dado ao grupo de enzimas proteolÃticas encontrada nos vegetais da famÃlia Bromeliaceae, da qual o abacaxi à o mais conhecido e rico nesta protease, que tem grande importÃncia na Ãrea de saÃde e de alimentos. O objetivo deste trabalho foi determinar as propriedades fÃsico-quÃmicas e purificar a bromelina presente no Ananas comosus L. Merril (abacaxi). A DiÃlise seguida da precipitaÃÃo com 80% de (NH4) 2SO4 realizado no extrato do abacaxi proporciou uma maior recuperaÃÃo de atividade e proteÃna produzindo um fator de purificaÃÃo cerca de 3 vezes. O CE e o CED80% apresentaram valores de pH Ãtimos de 8,5 e 7,2, respectivamente. Entretanto a bromelina foi estÃvel em todos os valores de pH testados (5,0-9,0) mostrando assim ser formada por diferentes fraÃÃes proteolÃticas. Em relaÃÃo à temperatura Ãtima, o CE e o CED80% apresentaram valor de 50ÂC e foram foram estÃveis atà temperaturas de 60 ÂC, sendo totalmente desnaturada a 80ÂC apÃs 30 minutos. Os valores de K M e V max aparentes, calculados segundo modelo de Lineweaver-Burk, foram: para azocaseÃna - K M = 2,48 mg/ml e V max = 35,29 U/mL e para azoalbumina - K M = 2,94 mg/ml e V max = 11,11 U/mL, mostrando assim praticamente a mesma afinidade por ambos os substratos. Entretanto a eficiÃncia catalÃtica foi maior para azocaseÃna que para azoalbumina (31,62 e 8,39 min -1, respectivamente). AtravÃs da eletroforese em gel SDS-PAGE, o extrato bruto apresentou 4 bandas de proteÃnas com massas moleculares de 40, 29 e 27 kDa e uma inferior a 14 kDa. AtravÃs de zimograma as bandas de 29 e a abaixo de 14kDa apresentaram atividade caseinolÃtica. A Cromatografia de gel-filtraÃÃo apresentou 2 picos, entretanto apenas o pico 2 com atividade proteolÃtica especifica de 116 U/mg de proteÃna e purificaÃÃo de 25,1 vezes, o qual apresentou 2 bandas de 29 e 26 kDa em gel SDS-PAGE. Pico 2 este quando aplicado na cromatografia de troca aniÃnica, rendendo um maior pico (P1) com atividade proteolÃtica o qual apresentou banda Ãnica em SDS- PAGE de 29 kDa com atividade caseinolÃtica comprovada em zimograma

ASSUNTO(S)

bromelain bromelina fplc bioquimica purification enzimas proteolÃticas purificaÃÃo ananas comosus, cysteine protease

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